一、胎牛血清成分

　　各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。

　　1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。

　　2、蛋白質(zhì)含量 3.5%～5.0%( w/v)

　　3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

　　4、無菌檢驗(yàn)　 陰性

　　5、支原體檢驗(yàn)　 陰性

　　6、細(xì)菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)

　　7、牛腹瀉病毒 陰性

　　8、大腸桿菌噬菌體 陰性

　　9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)　生長曲線(接種濃度)最大增殖濃度≥2.5×106 個/ml

　　細(xì)胞倍增時間 ≤15h，克隆率 ≥85%

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　　胎牛血清的主要成分有哪些

　　1.蛋白質(zhì)類

　　包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進(jìn)細(xì)胞附著)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(能結(jié)合鐵離子，減少其毒性和被細(xì)胞利用)、纖維粘連素(促進(jìn)細(xì)胞附著生長)等;

　　2.多肽類

　　主要是一些促進(jìn)細(xì)胞生長和分裂的生長因子，最主要的生長因子是血小板生長因子，還有成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子等，雖然在血清中含量很少，但對細(xì)胞的生長和分裂也起著重要作用;

　　3.激素類

　　激素對細(xì)胞的作用是多方面的。包括：

　　胰島素：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細(xì)胞分裂有關(guān);

　　類胰島素生長因子：能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合，從而有胰島素同樣的作用：

　　促生長激素：促進(jìn)細(xì)胞增殖的效應(yīng);

　　氫化可的松：血清中含有微量該成分，它可能具有促細(xì)胞貼附和增殖作用。但有人證明，血清中 的氫化可的松，在細(xì)胞密度較高時可能有抑制細(xì)胞生長和誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生分化的作用。

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　　4.其他成分

　　如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培養(yǎng)基中這些成分的作用并不明顯，與蛋白相結(jié)合的微量元素對細(xì)胞生長起促進(jìn)作用。

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。

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胎牛血清功能

1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

2. 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

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胎牛血清保存方法

1、需要長期保存的澳洲牛血清，例如澳洲南美胎牛血清，必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)澳洲牛血清有懸浮物，例如澳洲北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。

3、瓶裝胎牛血清(澳洲)南美解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

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4、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活.除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多，而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮，肥大細(xì)胞和血小板釋放組，增強(qiáng)吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5、血清中的沉淀物和絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理。顯微鏡下"小黑點(diǎn)"：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)"，常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下，此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號的血清。

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